Resumo Um macho de Pteronura brasiliensis (Carnivora: Mustelidae) foi encontrado morto às margens do Rio Negro, no Pantanal do estado de Mato Grosso do Sul, município de Aquidauana. Dois carrapatos encontrados aderidos à sua pele foram identificados, morfologicamente, como uma ninfa de segundo ínstar de Ornithodoros rostratus (Argasidae) e um macho de Amblyomma sculptum (Ixodidae). Para complementar a identificação morfológica, esses espécimes de carrapatos foram submetidos à extração de DNA e testados por meio de ensaios de PCR, para confirmar a identidade molecular dos espécimes. Além disso, os extraídos dos carrapatos foram testados e revelaram-se negativos nos ensaios de PCR para todos os patógenos testados. Também foram examinados 30 lotes, compostos por 174 indivíduos de O. rostratus, depositados na Coleção Acari do Instituto Butantan, e encontramos material de quatro estados brasileiros, incluindo-se um lote contendo 2 machos e 2 fêmeas de Aquidauana, estado de Mato Grosso do Sul (MS), coletado do solo. Este foi, portanto, o primeiro registro de O. rostratus parasitando P. brasiliensis e o primeiro registro de localidade (Aquidauana). Da mesma forma, A. sculptum é comumente encontrado no Pantanal e relatado aqui, pela segunda vez, parasitando a ariranha, hospedeiro pouco estudado em relação a ectoparasitas.

Abstract A male of Pteronura brasiliensis (Carnivora: Mustelidae) was found dead on the banks of the Rio Negro, in the Pantanal wetlands of Mato Grosso do Sul state, Aquidauana municipality. Two ticks found attached to its skin were morphologically identified as a second-instar nymph of Ornithodoros rostratus (Argasidae) and a male of Amblyomma sculptum (Ixodidae). In order to complement the morphological identification, these tick specimens were subjected to DNA extraction, and tested using PCR assays to confirm the molecular identity the specimens. Also, the tick DNA samples were tested and were negative in the PCR assays for all the pathogens tested. We also examined 30 batches, consisting of 174 individuals of O. rostratus deposited in the Acari Collection of the Butantan Institute, and we found material from four Brazilian states, including one batch containing 2 males and 2 females from Aquidauana, of Mato Grosso do Sul state, collected from the soil. This was therefore the first record of O. rostratus parasitizing P. brasiliensis and the first locality record (Aquidauana). Likewise, A. sculptum is commonly found in the Pantanal and is reported here for the second time parasitizing the giant otter, which is a host little studied regarding the ectoparasites.

Abstract There is a growing concern about the participation of wild hosts and reservoirs in the epidemiology of several pathogens, particularly within the context of environmental changes and the expansion of the One Health concept. The aim of this study was to investigate the presence of hemoplasmas in opossums rescued from the metropolitan region of Rio de Janeiro state, Brazil. Blood samples were collected from 15 Didelphis aurita and subjected to DNA extraction and PCR using primers for the 16S rRNA and 23S rRNA genes. Physical examination and hematological analysis were also performed. Three out of 15 opossums tested positive for hemotropic Mycoplasma spp. by PCR and showed hematological alterations such as anemia and leukocytosis. Clinical signs were non-specific and associated to traumatic lesions. The phylogenetic analysis indicated that the hemoplasma detected was positioned between 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detected in D. virginiana from North American and hemoplasmas recently detected in D. aurita from the state of Minas Gerais, Brazil. This study indicates the existence of hemoplasma infections in D. aurita from the metropolitan region of Rio de Janeiro, and reinforce the need for new epidemiological inquiries to clarify the participation of these in the dynamics of circulation of tick-borne pathogens.

Resumo Há uma crescente preocupação com a participação de hospedeiros e reservatórios silvestres na epidemiologia de diversos patógenos, principalmente no contexto das mudanças ambientais e da expansão do conceito "One Health". O objetivo deste estudo foi investigar a presença de hemoplasmas em gambás resgatados da região metropolitana do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 15 Didelphis aurita e submetidas à extração de DNA e PCR utilizando-se "primers" para os genes 16S rRNA e 23S rRNA. O exame físico e a análise hematológica também foram realizados. Três dos 15 gambás testaram positivo para Mycoplasma spp. hemotrópico por PCR. Os sinais clínicos eram inespecíficos e associados a lesões traumáticas. Anemia e leucocitose foram detectadas em animais positivos. A análise filogenética indicou que o hemoplasma detectado estava posicionado entre 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detectado em D. virginiana da América do Norte e hemoplasmas recentemente detectados em D. aurita do estado de Minas Gerais, Brasil. Este estudo indica a existência de infecções por hemoplasmas em D. aurita, da região metropolitana do Rio de Janeiro, e reforça a necessidade de novos inquéritos epidemiológicos, para esclarecer a participação destes na dinâmica de circulação de patógenos transmitidos por carrapatos.

Abstract South American opossums (Didelphis spp.) are definitive hosts of Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi and Sarcocystis falcatula. In Brazil, diverse studies have demonstrated a high frequency of Sarcocystis falcatula-like in sporocysts derived from opossums, and high genetic diversity has been observed in surface antigen-encoding genes (SAGs). In this study, genetic diversity of Sarcocystis spp. derived from Didelphis albiventris and Didelphis aurita from the cities of Campo Grande and São Paulo, was accessed by sequencing SAG2, SAG3, SAG4, the first internal transcribed spacer (ITS-1) and cytochrome c oxidase subunit I (cox1). Molecular identification was performed for 16 DNA samples obtained from sporocyst or culture-derived merozoites. The ITS-1, cox1, and SAG3 fragments were cloned, whereas SAG2 and SAG4 were sequenced directly from PCR products. Four alleles variants were found for SAG2, 13 for SAG3 and seven for SAG4, from which four, 13 and four, respectively, were novel. Twenty-seven allele variants were found for ITS-1, all phylogenetically related to S. falcatula-like previously described in Brazil. Sarcocystis sp. phylogenetically related to Sarcocystis rileyi was evidenced by cox1 in three opossums. Further studies are needed to clarify the role of Didelphis spp. as definitive hosts of Sarcocystis spp. other than that previous described.

Resumo Gambás sul-americanos (Didelphis spp.) são hospedeiros definitivos de Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi e Sarcocystis falcatula. No Brasil, diversos estudos têm demonstrado alta frequência de Sarcocystis falcatula-like em esporocistos derivados de gambás, com grande diversidade nos genes que codificam antígenos de superfície (SAGs). Neste estudo, a diversidade genética de Sarcocystis spp., oriundos de Didelphis albiventris e Didelphis aurita, dos municípios de Campo Grande e São Paulo, foi acessada por meio do sequenciamento de SAG2, SAG3 e SAG4, da primeira região espaçadora interna transcrita (ITS-1) e citocromo c oxidase subunidade I (cox1). Identificação molecular foi realizada em 16 amostras de DNA, obtidas de esporocistos ou merozoítos derivados de cultivo. Os fragmentos de ITS-1, cox1 e SAG3 foram clonados, enquanto SAG2 e SAG4 foram sequenciados diretamente dos produtos de PCR. Quatro alelos foram observados em SAG2, 13 em SAG3 e sete em SAG4, sendo novos quatro, 13 e quatro, respectivamente. Em ITS-1, 27 alelos foram observados, todos filogeneticamente relacionados à S. falcatula-like, previamente detectados no Brasil. Sarcocystis sp. filogeneticamente relacionado à Sarcocystis rileyi foi evidenciado por cox1 em três gambás. Mais estudos são necessários para entender o papel de Didelphis spp. como hospedeiro definitivo de Sarcocystis spp. diferentes daqueles previamente descritos.

Abstract The genus Neorickettsia comprises trematode-associated bacteria that can cause diseases in animals and humans. Despite detection of Neorickettsia antigens in the intestine of coatis kept in captivity in southern Brazil through immunohistochemistry, the molecular identity of the bacteria in South American procyonids remains elusive. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Neorickettsia sp. in blood samples from coatis in central-western Brazil. Between March 2018 and January 2019, animals were captured and recaptured in two areas of the Cerrado (Parque Estadual do Prosa, PEP; and Vila da Base Aérea, VBA) located in the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, central-western Brazil. All captures were performed according to convenience. DNA from 97 blood samples was subjected to nested PCR (nPCR) targeting a fragment of the 16S rRNA gene of Neorickettsia sp. Six samples (3.6%; five from VBA and one from PEP) from different coatis were positive in nPCR based on the 16S rRNA. The sequences obtained (~500 bp) showed ˃ 99% similarity to N. risticii. Phylogenetic analysis clustered the sequences detected in the present study in a clade with N. risticii. This is the first molecular detection of Neorickettsia sp. in coatis in Brazil.

Resumo O gênero Neorickettsia compreende bactérias associadas a trematódeos que podem causar doenças em animais e humanos. Apesar da detecção de antígenos de Neorickettsia por imuno-histoquímica no intestino de quatis mantidos em cativeiro no sul do Brasil, a identidade molecular da bactéria em procionídeos da América do Sul permanece indefinida. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Neorickettsia sp. em amostras de sangue de quatis do Centro-Oeste do Brasil. Entre março de 2018 e janeiro de 2019, os animais foram capturados em duas áreas de Cerrado (Parque Estadual do Prosa PEP e Vila da Base Aérea VBA) localizadas na cidade de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Centro-Oeste do Brasil. Todas as capturas e recapturas foram realizadas por conveniência. O DNA de 97 amostras de sangue foi submetido a "nested" (nPCR), baseada em um fragmento do gene 16S rRNA de Neorickettsia sp. Seis (3,6% - 5 de VBA e 1 de PEP) amostras de quatis diferentes foram positivas na nPCR, baseada no rRNA 16S. As sequências obtidas (~500 pb) apresentaram ˃99% de identidade com N. risticii. A inferência filogenética agrupou as sequencias detectadas no presente estudo em um clado com N. risticii. Esta é a primeira detecção molecular de Neorickettsia sp. em quatis do Brasil.

Abstract Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurological disease caused by Sarcocystis neurona. Immunofluorescence antibody tests (IFATs) have been widely used to identify exposure of horses to S. neurona in Brazil. Here we used IFAT to search for IgG antibodies against Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) and S. neurona (SN138) in sera from 342 horses sampled in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state (Midwestern), and São Paulo, São Paulo state (Southeastern), Brazil. The 1:25 cutoff value was chosen to maximize sensitivity of the test. IgG antibodies against S. neurona were detected in 239 horses (69.88%), whereas IgG antibodies against S. falcatula-like were detected in 177 horses (51.75%). Sera from 132 horses (38.59%) reacted against both isolates. Absence of reactivity was evidenced in 58/342 horses (16.95%). The lower cutoff used, and the presence of opossums infected with S. falcatula-like and Sarcocystis spp. in the regions where the horses were sampled, might justify the high seroprevalence observed here. Owing to the similarity among antigens targeted in immunoassays, reports on S. neurona-seropositive horses in Brazil may also derive from the exposure of horses to other Sarcocystis species. The role of other Sarcocystis species in causing neurological diseases in horses in Brazil remains unclear.

Resumo Mieloencefalite protozoária equina (MPE) é uma doença neurológica causada por Sarcocystis neurona. Reação de imunofluorescência indireta (RIFI) tem sido utilizada para identificar a exposição de equinos à S. neurona no Brasil. Neste estudo, a RIFI foi utilizada para avaliar a presença de anticorpos IgG anti-Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) e anti-S. neurona (SN138) no soro de 342 equinos de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Centro-oeste) e São Paulo, São Paulo (Sudeste), Brasil. O ponto de corte de 1:25 foi escolhido para maximizar a sensibilidade. Anticorpos IgG anti-S. neurona foram detectados em 239 cavalos (69,88%), enquanto anticorpos IgG anti-S. falcatula-like foram detectados em 177 cavalos (51,75%). O soro de 132 animais (38,59%) reagiu contra ambos os isolados. A ausência de reatividade foi evidenciada em 58/342 animais (16,95%). O baixo ponto de corte e a presença de gambás infectados com S. falcatula-like e Sarcocystis spp., nas regiões onde os equinos foram amostrados podem justificar a alta soroprevalência aqui observada. Devido à similaridade entre antígenos de superfície detectados nos imunoensaios, relatos de soropositividade contra S. neurona no Brasil podem resultar da exposição dos equinos a outras espécies de Sarcocystis. O papel de outras espécies de Sarcocystis como causa de doença neurológica em equinos no Brasil permanece incerto.

Resumo A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma das doenças veiculadas por carrapatos com apresentações multisistêmicas mais relevantes em todo o mundo. A desregulação do sistema imune vem sendo proposta como o principal mecanismo envolvido na patogênese e lesão de tecidos em cães com EMC. A infecção experimental de pastores alemães nesta pesquisa evidenciou marcadas alterações patológicas em linfonodos, baço e também infiltração mononuclear em órgãos e tecidos. A imunofenotipagem de células em linfonodos, baço e tecidos lesados destacou diferenças em subconjuntos de linfócitos, expressão local de subclasses de imunoglobulinas e de moléculas MHCII entre cães infectados e controle. Esses achados sugerem que um viés Th1 e uma resposta imune compartimentalizada estão relacionados às alterações imunofenotípicas e imunopatológicas em cães com EMC experimental aguda.

Abstract Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is one of the most important tick-borne diseases worldwide, with multisystemic presentations. Immune dysregulation has been proposed as the primary mechanism involved in its pathogenesis and in tissue injury in dogs with CME. Experimental infection of German Shepherd dogs in the present study demonstrated that CME caused marked pathological changes in their lymph nodes and spleen, and also gave rise to mononuclear infiltration in organs and tissues. Immunophenotyping of cells in lymph nodes, spleen and injured tissues highlighted differences in lymphocyte subsets, local expression of immunoglobulin subclasses and MHCII molecules between infected and control dogs. These findings suggest that the immunophenotypic and immunopathological changes in dogs with acute experimental CME are related to Th1 bias and compartmentalized immune response.

Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Resumo Foi avaliada a epidemiologia, hematologia e patologia das infecções por Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Platynosomum illiciens, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV) e das coinfecções em gatos não domiciliados em uma área endêmica para leishmaniose. O diagnóstico foi realizado por exames sorológicos e necropsia. Foram descritas lesões macroscópicas e achados histopatológicos. Usaram-se imuno-histoquímica e hibridização cromogênica in situ para detecção de L. infantum. Encontrou-se infecção em 27 dos 50 gatos amostrados, dentre eles, 14 apresentavam coinfecções. Foi observada forte correlação entre esplenomegalia e linfadenomegalia com FeLV, e associação entre lesões hepáticas e caquexia com parasitismo por P. illiciens. Além disso, foi encontrado um aumento significativo na contagem de monócitos nos animais infectados pelo FeLV e uma diminuição na contagem de hemácias nos animais infectados pelo FIV. Formas amastigotas de Leishmania spp. e alterações teciduais foram detectadas em órgãos linfoides de um animal coinfectado com P. illiciens, T. gondii e FIV. O poliparasitismo registrado em gatos errantes do Centro-Oeste brasileiro deve ser considerado nas estratégias de controle de zoonoses. Além disso, gatos errantes de Campo Grande podem ser fontes de infecção de FIV, FeLV e P. illiciens para populações de gatos domiciliados.

Abstract We evaluated the epidemiological, hematological, and pathological data of Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Platynosomum illiciens, feline immunodeficiency virus (FIV), and feline leukemia virus (FeLV) infections and the coinfections in stray cats of an endemic area for leishmaniasis. The diagnosis was performed by serological tests and necropsy. We described gross lesions and histopathological findings. We used immunohistochemistry and chromogenic in situ hybridization for L. infantum detection. We found infection in 27 out of 50 sampled cats, among them, 14 presented coinfections. A strong correlation between splenomegaly and lymphadenomegaly with FeLV, and an association between hepatic lesions and cachexia with parasitism due to P. illiciens were observed. Moreover, we found a significant increase in the monocyte count in the FeLV-infected and a decrease in the red blood cell count in the FIV-infected animals. Amastigote forms of Leishmania spp. and tissue changes were detected in lymphoid organs of an animal coinfected with P. illiciens, T. gondii, and FIV. Polyparasitism recorded in stray cats of the Brazilian Midwest should be considered in effective control strategies for public health diseases. Moreover, stray cats of Campo Grande may be a source of infection of FIV, FeLV and P. illiciens for populations of domiciled cats.

Resumo A bartonelose é uma zoonose transmitida por vetores, com distribuição mundial, que infecta várias espécies de mamíferos. Apesar dos estudos conduzidos no Brasil, informações sobre Bartonella em cães são escassas. Portanto, foi realizado um estudo retrospectivo para investigar a exposição a Bartonella sp. em cães cães, utilizando-se o ensaio de imunofluorescência indireta (IFA). Trezentas e trinta e cinco amostras de soro de cães, previamente testadas para patógenos transmitidos pelos vetores, Toxoplasma gondii e Neospora caninum foram avaliadas quanto à presença de anticorpos IgG contra Bartonella sp. Todos os cães eram oriundos da região metropolitana de Ribeirão Preto, Nordeste do Estado de São Paulo. Vinte e oito amostras (8,3%) foram positivas para Bartonella sp. no ponto de corte de 64. Entre as 28 amostras positivas, 16 (57,1%) também foram positivas para Ehrlichia canis, 12 (42,8%) para Babesia vogeli, cinco (17,8%) para T. gondii e três (10,7%) para L. infantum e N. caninum. Os resultados demonstraram que os cães amostrados foram expostos a Bartonella sp. Como os animais eram de proprietários particulares, nossos achados demonstram que as pessoas também podem ter sido expostas a Bartonella sp. São necessários estudos para avaliar se a infecção por B. canis ou E. canis constitui fator de risco para infecção por Bartonella em cães.

Abstract Bartonellosis is a vector-borne zoonotic disease with worldwide distribution that infect a broad spectrum of mammalian species. Despite the recent studies carried out in Brazil, information regarding Bartonella in dogs are scarce. Therefore, we performed a retrospective study to investigate the exposure to Bartonella sp. in dogs by indirect immunofluorescence assay (IFA). Three hundred and thirty-five archived serum samples from dogs previously tested for vector-borne pathogens, Toxoplasma gondii, and Neospora caninum were screened for the presence of IgG antibodies to Bartonella sp. All dogs originated from the Metropolitan region of Ribeirão Preto, northeast of the State of São Paulo. Twenty-eight samples (8.3%) were positive for Bartonella sp. at the cut-off of 64. Among the 28 seropositive samples for Bartonella sp., 16 (57.1%) were also seropositive for Ehrlichia canis, 12 (42.8%) for Babesia vogeli, five (17.8%) for T. gondii and three (10.7%) for L. infantum and N. caninum. Our results demonstrated that dogs sampled were exposed to Bartonella sp. Since all the animals sampled in the present study were from private owners, our findings demonstrate that these people may also be exposed to Bartonella sp. Further studies designed to assess whether the infection by other arthropod-borne pathogens such as B. vogeli and E. canis are risk factors for Bartonella infection are needed.

Resumo A febre Q, causada pela γ-proteobactéria Coxiella burnetii, é uma zoonose de grande importância e impacto global. Este agente tem alta transmissibilidade e pode se espalhar por longas distâncias via vento, em que um pequeno número de partículas aerossolizadas são necessárias para infectar hospedeiros suscetíveis. O diagnóstico clínico da febre Q é difícil devido à variedade de sinais clínicos compartilhados com outras doenças. No Brasil, estudos relacionados à C. burnetii são constantemente realizados. Esta revisão visa aumentar o número de abordagens já estudadas, levando ao seguinte questionamento: a febre Q é uma doença desconhecida, negligenciada ou tem ocorrência focal em certas áreas (exóticas/raras) no país?

Abstract Q fever, caused by the γ-proteobacterium Coxiella burnetii, is a zoonosis of great importance and global impact. This agent has high transmissibility and can spread over long distances via wind, in which a small number of aerosolized particles are needed to infect susceptible hosts. The clinical diagnosis of Q fever is difficult owing to the variety of clinical signs shared with other diseases. In Brazil, studies related to C. burnetii are constantly being conducted, and this review aims to increase the number of approaches already studied, leading to the following question: is Q fever an unknown, neglected disease, or does it have a focal occurrence in certain areas (exotic/rare) in the country?

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent’s ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Em bovinos, infecções por Trypanosoma vivax geram sinais clínicos inespecíficos que, associados a intervalos aparasitêmicos, faz com que o diagnóstico da enfermidade seja desafiador. No Brasil, somente aceturato de diaminazeno e cloridrato de isometamidum (ISM) estão disponíveis para o tratamento da tripanossomose bovina. Este trabalho teve como objetivo acompanhar bovinos leiteiros naturalmente infectados por T. vivax, após o tratamento com ISM por meio de técnicas moleculares e sorológica. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, sendo estes tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/kg por via intramuscular profunda, nos dias 0 e 150. Foram avaliadas, para diagnóstico de T. vivax, amostras de sangue acrescido de EDTA e soro, colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após os tratamentos pela reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA). Verificou-se a presença de animais com persistência na detecção de DNA de T. vivax pela PCR e LAMP, bem como detecção contínua de anticorpos IgG anti-T. vivax pelo método de ELISA, sugerindo a presença de resistência de T. vivax ao ISM. A combinação dos testes LAMP e ELISA pode evitar falsos diagnósticos da eliminação do parasita nos bovinos tratados, contribuindo para um melhor controle da doença. Este é o primeiro experimento que demonstra infecção persistente do T. vivax em rebanho naturalmente infectado, tratado com ISM, e evidencia possível resistência ao quimioterápico no Brasil.

Abstract Trypanosoma vivax infections cause nonspecific clinical signs in cattle associated with aparasitemic intervals, making disease diagnosis a challenge. In Brazil, diminazene aceturate and isometamidium chloride (ISM) are available to treat bovine trypanosomosis. The objective of this study was to follow-up, by molecular and serological techniques, dairy cattle naturally infected by T. vivax after ISM treatment. Thirty cattle naturally infected with T. vivax received two applications of ISM, at a dosage of 1.0 mg/kg intramuscularly, on days 0 and 150. For T. vivax diagnosis, EDTA-blood and serum samples were evaluated on 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, and 240 days after treatment PCR, Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and ELISA. Animals with persistent detection of T. vivax DNA by both PCR and LAMP were found and continuous detection of anti-T. vivax IgG antibodies by ELISA, suggesting the presence of T. vivax resistance to ISM. The combination of LAMP and ELISA tests can prevent misdiagnosis of the parasite clearance in treated cattle, contributing to better disease control. This is the first experiment that demonstrates the persistence infection of T. vivax under ISM treatment in a natural infected herd and evidence of ISM chemotherapy-resistant T. vivax in Brazil.

Resumo Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados.

Abstract Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.

Resumo Anaplasma marginale é uma bactéria Gram-negativa intracelular obrigatória de eritrócitos de ruminantes e responsável pela anaplasmose bovina. A diversidade genética de A. marginale tem sido caracterizada com base nas sequências das principais proteínas de superfície (MSPs), como a MSP1α. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Dessa forma, 343 amostras de sangue foram submetidas ao ensaio iELISA, utilizando-se a proteína recombinante MSP5. Das 343 amostras de sangue, 235 (68,5%) foram escolhidas aleatoriamente e submetidas à extração de DNA, qPCR e PCR convencional para gene msp1α, para determinação das sequências de aminoácidos e classificação dos genótipos. Os resultados do iELISA mostraram 81,34% de soropositividade (279/343), enquanto qPCR revelou 224 amostras positivas (95,32%). Dentre estas na qPCR, 67,4% (151/224) mostraram-se positivas no PCR convencional. Das 50 sequências obtidas, 21 cepas não haviam sido relatadas anteriormente. Em relação aos genótipos, H (26/50) e E (18/50) foram os mais frequentes, enquanto os genótipos F e C foram identificados apenas duas vezes cada, e B e G uma vez cada. Em conclusão, alta prevalência e marcante diversidade genética de A. marginale foram observadas em rebanhos leiteiros no estado do Maranhão.

Abstract Anaplasma marginale is an obligate intracellular Gram-negative bacterium found in ruminants’ erythrocytes and is the etiological agent of bovine anaplasmosis. The bacterium’s genetic diversity has been characterized based on sequences of major surface proteins (MSPs), such as MSP1α. The aim of the present study was to investigate the genetic diversity of A. marginale in cattle in the state of Maranhão, northeastern Brazil. To this end, 343 blood samples were harvested and subjected to iELISA assays using the recombinant surface protein MSP5. Out of 343 blood samples, 235 (68.5%) were randomly chosen and submitted to DNA extraction, qPCR and conventional PCR targeting the msp1α gene to determine amino acid sequences and classify the genotypes. The iELISA results showed 81.34% seropositivity (279/343), whereas qPCR revealed 224 positive samples (95.32%). Among these qPCR-positive samples, 67.4% (151/224) were also positive in the cPCR. Among the 50 obtained sequences, 21 strains had not been previously reported. Regarding the genotypes, H (26/50) and E (18/50) were identified most often, while genotypes F and C were only identified twice each and B and G once each. In conclusion, high prevalence and genetic diversity for A. marginale were observed in dairy cattle herds in the state of Maranhão.

Resumo O objetivo deste estudo foi descrever pela primeira vez a ocorrência da mosca Hippoboscidae Ornithoctona erythrocephala em uma seriema (Cariama cristata). Um espécime de díptero foi encontrado entre as penas de dessa ave, que havia sido encaminhada para necropsia ao Serviço de Patologia de Animais Selvagens, UNESP, Jaboticabal. A mosca foi armazenada em álcool absoluto e enviada ao Instituto de Biociências da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul para identificação por um especialista. Baseado em características morfológicas, o espécime foi identificado como fêmea de Ornithoctona erythrocephala. Este relato oferece a descrição de um novo hospedeiro para O. erythrocephala.

Abstract The aim of this study was to report, for the first time, the occurrence of the hippoboscid fly Ornithoctona erythrocephala on a red-legged seriema (Cariama cristata). A Diptera specimen was found among the feathers of a free-living red-legged seriema, which was referred to necropsy at the Wild Animal Pathology Service, UNESP Jaboticabal. The fly was collected, stored in absolute alcohol, and shipped to the Institute of Biosciences of the Federal University of Mato Grosso do Sul for proper identification. Based on morphological characters, the specimen was identified as a female of Ornithoctona erythrocephala. This study provides a report on a new host for O. erythrocephala.